通常、同種抗体は自己赤血球の陰性抗原に対して、輸血又は妊娠による免疫刺激によって抗体が産生されます（例えば、E―型の人が抗Eを保有、E＋型の人が同種抗Eは保有しない）。不規則抗体同定は、通常不規則抗体同定用パネル赤血球（市販品10～11本組）を用いて患者血漿（血清）との反応から抗体特異性を鑑別（同定）し、最終的には本人の抗原が陰性であることを確認し同種抗体であることを確定します。また、被検者が抗赤血球自己抗体（以下、自己抗体）を同時に保有した際には、自己対照赤血球を含めて全ての同種赤血球と陽性になることから、混在する抗体の特異性を鑑別するのは容易ではありません。しかも頻回又は直近に輸血歴ある被検者の場合、体内には同種赤血球が混在しているため、本人の血液型（表現型）も確定できず、血液型から抗体を推定することも難しくなります。このような複雑な検体に遭遇した際には、まずは抗体の特異性を決定し、その後、本人の血液型を遺伝子タイピングで推定、同種抗体又は自己抗体と決定する方法もあります。3＋以上の反応を示す自己抗体が混在した場合、パネル赤血球との反応から抗体特異性を決定することが難しくなるため、主な血液型が既知の赤血球を数種類用いて別々に吸着操作を行い、抗体を分離して同定作業を行います。以下に示す方法は、例として最大6種類の抗体（抗D、抗C、抗E、抗c、抗e、自己抗体）が存在したと仮定した際の同定を吸着操作で抗体を分離し、同定する方法です。この例では、自己抗体がありますので吸着前の反応は全て3＋～4＋の反応です。
3本の試験管（①～③）に、表現型の異なる3種類（R1R1、R2R2、rr）の赤血球沈渣をそれぞれ1ｍL程度採取し、そこに被検者の血漿（血清）又は解離液とPEGを加えてPEG吸着を行い、吸着後上清とパネル赤血球との反応性から抗体特異性を決定します（抗体価が高い抗体の場合は数回の吸着操作を要しますが、吸着操作の詳細についてはここでは割愛します）。吸着上清が陰性であれば、抗体は血液型特異性のない自己抗体のみが存在していたことになります。また、仮に特異性のある抗体が検出された場合は、自己抗体＋特異性のある抗体という解釈になりますが、この特異性が自己抗体による特異性か、同種抗体による特異性なのかの判断は、自己赤血球の血液型に基づいて決定されます。今回の例では、頻回又は直近に輸血歴がある被検者のため、血清学での血液型判定が出来ません。そこで、遺伝子タイピングによる表現型の推定を行ったということです。
この方法は、被検者のバフィーコート（白血球層部分）からゲノムDNAを抽出し、PCR-SSP法によってそれぞれの抗原を推定します。現在の赤血球製剤は白血球除去製剤であることから、赤血球製剤の輸血を行ってもバフィーコートから得られるDNAは本人由来である点がポイントです。対立関係にある血液型は、各対応遺伝子の一塩基置換（SNPs）によって生じています。従って、その一塩基の違いを検出可能なプライマーを用いて判定する原理です。例えば、RhEは、RHCE遺伝子の676番目の塩基がC（シトシン）ですが、eの場合はG（グアニン）となっています。これをPCR反応によって鑑別するということです。このような原理で代表的な血液型抗原（14抗原）の推定が可能となっています。
血清学で調べた血液型と遺伝子タイピングから推定した血液型（表現型）がどの程度一致するかについては、事前に2,000検体を対象に検討し、99.6％以上の一致率であることを確認しています。従って、とくに月一、数週間に一回程度の輸血を継続的に実施している血液疾患（MDSなど）の患者さんや抗CD38製剤投与後の患者さんの血液型検査には有用と考えています。
【関連blog】
・#031：自己抗体の血液型特異性の（はてな？）
https://www.bloodgroup-tech.work/entry/2020/03/14/062817
・#080：遺伝子タイピングによる表現型の推定の（はてな？）
https://www.bloodgroup-tech.work/entry/2020/09/03/053354
